β-Amyloid ELISA 試劑盒

β-Amyloid ELISA 試劑盒

——定量檢測 Aβ40/Aβ42

　　阿爾茨海默癥（Alzheimer's Disease, AD），俗稱老年癡呆癥，其特征是在大腦神經細胞中存在老年斑（Senile Plaques，SPs） 和神經元纖維纏結（Neuro Fibrillary Tangles，NFT），老年斑的主要組成蛋白是 β- 淀粉樣多肽（Amyloid Peptide，Aβ）40 和 42（43），Aβ42 比 Aβ40 更容易發生聚集。因此，蛋白樣多肽的聚集開始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出現了 Aβ42 而沒有出現 Aβ40 是阿 爾茨海默癥的早期特征；出現了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出現則代表進入阿爾茨海默癥的晚期階段。

　　本產品可檢測與阿爾茨海默病相關的淀粉樣蛋白β 蛋白質（1-40）以及淀粉樣蛋白β 蛋白質（1-42）的高靈敏度 ELISA 試劑盒。與以往試劑盒相比較，檢測靈敏度提高約 10 倍，檢測范圍在 0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因為以往產品同樣標志抗體Fab’化，非特異性結合降低。由于運用的是武田藥品工業株式會社開發的特異性非常高的單克隆抗體，不僅是組織提取液、培養上清液、腦脊髓液，而且以前檢測較困難的血漿中 Aβ40 以及 Aβ42 亦可高靈敏度檢測。

◆特點

●  可檢測多種樣品類型：腦組織樣品，培養基上清樣品，腦脊髓液樣品， 血漿樣品等

●  特異性強的抗體，避免非特異性結合

　 BAN50：Ａβ肽Ｎ末端１-16 特異性

　 BNT77：Aβ11-28特異性

 　BA27：Aβ40 Ｃ末端特異性

　 BC05：Aβ42 Ｃ末端特異性

●  高靈敏度，可檢測至 pmol 級含量

●  使用此產品的文章已在 Science、Biochemistry、Neuron 等多家國際頂尖刊物發表

 ◆檢測原理

◆試劑盒種類

試劑盒組成

◆實驗流程

① 加入100 μL 的標準品和樣品，在４度冰箱中密封過夜。  ↓ ② 加入 HRP 標記的抗體溶液，在４度冰箱中孵育。 ↓ ③ 加入100 μL TMB 溶液室溫孵育 30 分鐘，避光，密封蓋子，進行顯色反應。 ↓ ④ 加入100 μL 終止液，測 OD 450 nm值。

◆案例

案例1. 人、小鼠血漿的測定

　　使用 EDTA2K 真空采xue管采血，置于 5000 g、4℃、離心15分鐘，分離血漿，使用之前存放于-80℃。

　　用試劑盒附帶的標準稀釋液，４倍樣本稀釋后測定。

　　（*Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的測定使用人β淀粉樣蛋白（1-40）ELISA試劑盒 WakoⅡ（產品編號：298-64601）以及人/大鼠β淀粉樣蛋白（40）ELISA試劑盒 WakoⅡ（產品編號：294-64701）。

案例2. 小鼠腦組織的測定

　　用 2 mL 的 Tris 鹽水提取12月齡 APP 轉基因小鼠（J20）的腦半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用試劑盒附帶的標準稀釋液，２倍樣本稀釋后測定。

　　除了轉基因（tg）小鼠，也可測定野生型（wt）小鼠的微量 Aβ 。

（數據提供：東京大學大學院藥學研究科 臨床藥學教室 巖坪教授 橋本助手）

標準曲線

　　用試劑盒附帶的標準溶液制作標準曲線。結果顯示，在 0.1~20.0（pmol/L）范圍內，接近于直線。

加標回收測試

　　向血漿中分別加入５、10、20（pmol/L），４倍稀釋后記錄測定時的回收率（％）（測定值/理論值）。基本顯示較高的回收率。

稀釋實驗

　　將Ａ、Ｃ、Ｅ的正常人血漿稀釋２~16 倍后求稀釋曲線。結果顯示，特別是人/大鼠系列獲得了良好的稀釋曲線。

◆Aβ相關ELISA試劑盒選擇指南

※1  Aβ(x-40)、Aβ(x-42)為N末端被切斷或修飾的Aβ肽。

※2  與292-62301比較抗原抗體反應相對穩定

※3  與294-62501比較抗原抗體反應相對穩定

※4  未驗證

※5  換算為MAP16肽

◆適用樣品

※2  與292-62301比較抗原抗體反應相對穩定

※3  與294-62501比較抗原抗體反應相對穩定

※4  未驗證

※6  可檢測，但與血漿相比檢測數值容易隨時間降低