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    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒

    簡要描述:CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料檢測自噬小泡和監控活細胞自噬流,選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優化,不染溶酶體,在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉染,可以在活細胞中監控細胞自噬的快速定量方法。

    基礎信息

    產品型號

    廠商性質

    生產廠家

    更新時間

    2025-12-22

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    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒





      CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料檢測自噬小泡和監控活細胞自噬流,選擇性標記積累的自噬小泡。染料已通過優化,不染溶酶體,在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉染,可以在活細胞中監控細胞自噬的快速定量方法。

    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒

    CYTO-ID® Autophagy Detection Kit

    ◆特點


    ● 無需轉染,定量監測活細胞中的自噬情況

    ● 免去 LC3-GFP 轉染所需的時間和精力以及轉染效率的驗證

    ● 含有特殊基團的染料選擇性地染色自噬小泡

    ● 試劑盒中包含已知活性的自噬抑制劑與激活劑

    ● 快速量化原生異質性細胞群中的自噬

    ● 選擇性地染色,可檢測和區分自噬流(autophagic flux)和自噬溶酶體的積累

    ● 不染溶酶體,減少其他染料的背景干擾

     便于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑


    ◆原理


      該產品所用探針是陽離子兩親性示蹤劑(CAT)染料,以類似誘導磷脂藥物的方式迅速進入到細胞中。染料的功能基團能夠選擇性標記與自噬通路相關的小泡,而不會在溶酶體中聚集。


    胞內物質被擴大的膜囊包裹,吞噬泡形成雙層膜囊泡,成為自噬體。自噬體外膜隨后與溶酶體融合,和內部物質被自噬性溶酶體降解。自噬的各種調節因子也被描繪于圖中。

    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒

    自噬原理圖



    ◆應用


    省時省力,無需轉染即可自快速全面的標記自噬小泡


    為了演示 CYTO-ID® Green detection reagent 的優勢,先用 RFP-LC3 表達載體轉染 HeLa 細胞,10 μM 的 Tamoxifen 處理過夜,然后用 CYTO-ID® 綠色檢測試劑染色。LC3 轉染法需要過夜,而 CYTO-ID® 綠色檢測試劑的方法在15-30分鐘內標記細胞達100%。圖A:綠信號顯示自噬小泡的 CYTO-ID® 綠染;圖B:成功轉染細胞的 RFP-LC3 表達(紅色);圖C:自噬體的特異性標記 LC3,與 CYTO-ID® 綠色染料標記的小泡共定位的復合圖像。

    的發放

    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒




    無轉染的自噬檢測


    Hela細胞進行饑餓與恢復,然后使用 CYTO-ID® Green detection reagent 標記。染料可以明確檢測和量化自噬及與自噬誘導相關的自噬小泡前體。圖1A:穩定表達 GFP-LC3 的CHO細胞,結果顯示對照組與饑餓的細胞群的相對較差的基線分離,自噬難以量化。圖1B:CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 特異性標記 LC3 蛋白依賴的自噬小泡,免去轉染操作。



    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒



    自噬積累和自噬流的可視化


    可用熒光顯微鏡觀察CYTO-ID® 自噬綠色染料檢測的自噬液泡積累和自噬流。Hela細胞用以下試劑進行模擬誘導,0.2% DMSO(A)和100 μM  Clonidine hydrochloride(B)進行誘導,5 μM Loperamide hydrochloride 和 1 μM PP242 hydrate(D)在37°C誘導12小時。處理后,細胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent 孵育10分鐘,再用分析緩沖液清洗。細胞核被 Hoechst 33342 染料復染為藍色。



    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒


    避免非特異性溶酶體染色的背景干擾


    相比其他 MDC 染色溶酶體檢測,CYTO-ID® 綠色染料無溶酶體染色背景,CYTO-ID® Autophagy kit 無需紫外活細胞分析,在顯微鏡共標記應用中,與 Hoechst 染料兼容。



    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒


    使用流式細胞儀通過 CYTO-ID® Autophagy Detection 

    Kit 分析自噬


    對照組(紅線峰值)無誘導,10 uM Tamoxifen(ALX-550-095)處理 Jurkat 細胞(白血病T細胞)(藍線峰值)。處理18小時后,細胞結合 CYTO-ID® 綠色檢測試劑,然后不經過流式細胞儀清洗,進行分析。結果通過直方圖呈現。對照組細胞被染色,但熒光亮度低。實驗組中,CYTO-ID® 綠色熒光信號增加約2倍,表明 Tamoxifen 處理能引起 Jurkat 細胞中自噬的增加。




    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒

    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒

    使用 mTOR 激酶抑制劑 Rapamycin 處理 HepG2 細胞孵育過夜,結果顯示 CYTO-ID® 染色信號升高。


    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒


    CYTO-ID® 綠色染料大多與 RFP-LC3蛋白共定位。0.1 μM Rapamycin(典型自噬誘導劑)處理過夜,轉染 Hela 細胞表達RFP-LC3。

    A: CYTO-ID® Green 染色; B: RFP-LC3; C: 合成圖像。



    CYTO-ID® 自噬檢測試劑盒 2.0



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    規格

    備注

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    產品列表
    產品編號產品名稱產品規格產品等級備注
    ENZ-51031-K200Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬檢測試劑盒200 tests--
    ENZ-51031-0050Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬檢測試劑盒50 tests--


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